Persiapan Sampel:
Pengumpulan sampel: Kumpulkan sampel seperti darah, jaringan, air liur, dan urin sesuai dengan tujuan percobaan.
Ekstraksi DNA: Gunakan kit ekstraksi DNA khusus untuk mengekstrak DNA dari sampel.
Persiapan Reaksi PCR:
Desain Primer: Desain pasangan primer spesifik berdasarkan urutan target untuk amplifikasi DNA template.
Siapkan campuran reaksi: termasuk DNA templat, primer, buffer, DNA polimerase, DNTPS (deoxynucleoside triphosphats), mg 2+, dll.
Setel program PCR:
Pengaturan Instrumen PCR: Masukkan parameter siklus PCR yang telah ditentukan, seperti suhu pemanasan awal 95 derajat, suhu denaturasi (seperti 95 derajat), suhu anil (seperti 55 derajat), suhu ekstensi (seperti 72 derajat), dan jumlah siklus.
Reaksi PCR:
Tambahkan Sampel: Tambahkan campuran reaksi ke tangki reaksi PCR atau chip, dan setiap sampel biasanya memiliki satu reaksi dengan baik.
Lakukan PCR: Siklus instrumen PCR sesuai dengan program yang telah ditetapkan, termasuk langkah pemanas, pendinginan, anil, dan ekstensi.
Analisis Produk:
Pendinginan Setelah Amplifikasi: Setelah PCR selesai, sampel didinginkan secara singkat pada 4 derajat.
Pemisahan elektroforetik: Gunakan teknologi elektroforesis gel, seperti elektroforesis gel agarosa, untuk memisahkan produk PCR dengan panjang yang berbeda.
Pemindaian fluoresensi: Primer berlabel fluoresensi memancarkan cahaya dari panjang gelombang tertentu dalam produk yang diamplifikasi, dan instrumen PCR membaca sinyal -sinyal ini dan mencatatnya.
Pemrosesan Data dan Interpretasi:
Perangkat Lunak Analisis Data: Gunakan perangkat lunak khusus untuk menganalisis sinyal fluoresen dan menghitung konsentrasi atau konsentrasi relatif dari fragmen target.
Interpretasi Hasil: Berdasarkan kurva PCR dan baseline, tentukan apakah PCR berhasil, apakah fragmen target ada, dan seberapa banyak itu.
Rekaman dan pelestarian hasil:
Catat hasil dalam laporan eksperimental dan pertahankan data dan sampel asli dengan benar.